流式调电压（流式调电压和增益）
本文目录一览：
流式实验该准备多少管样本?如何设置对照?
单阳对照即单阳管，是只添加一种荧光抗体的样本管。 多色流式实验中，由于荧光素的发射波长覆盖范围较广，荧光可能产生重叠，对实验结果的数据分析造成一定的干扰。此种情况下，我们通常会设置单阳管进行补偿调节。同时，单阳管还可以辅助我们调节通道电压，防止信号超出接收范围。
上机的时候，除了样本以外，需要如下额外的7个管子来调机器： 不加任何抗体的，用来调节FCS和SCC 3个管子，分别加了同型非特异抗体，经过了孵育和洗涤。
做补偿调节，需要以下的样本，无任何染色的样本，分别是FITC，PE，PerCP还有APC单染阳性的样本，所以你这里需要一共5个管子。在纯手工的年代，你需要画出这四个颜色两两配对的散点图，比如FITC-PE，FITC-PerCP，FITC-APC，PE-PerCP，PE-APC，PerCP-APC，这一共6个散点图。
准备实验管并编号，例如：1号管加入IgG1抗体，2号管加入CD4/CD8抗体，3号管加入CD14/CD45抗体，4号管则作为对照。 在每支试管中加入相应抗体10μl，然后加入50μl全血样本，轻轻震荡混合后，室温下避光反应20分钟。在加入抗体前需确保血样充分混匀。
在记录前，把每个样本都先跑一边，目的是观察电压的设置是否正确。比如FITC和PE会有重叠，上FITC阳性管的时候，虽然其他通道会有些信号，但FITC通道的信号应该最强。如果发生了其他通道信号强于目的通道的情况，就要进一步调节电压，是目的通道的信号最强。
流式细胞术实验：制备细胞悬液，计数 分装，按照每个EP（5ml）管1-2*10 6个细胞分装，3500rpm，4度离心。用100ulPBS重悬，加入10ul大鼠血清封闭，4度避光30min。加入相应的荧光标记的抗体，混匀，避光，4度孵育30min。加入1mlPBS洗两遍。
flowjo软件可以调电压吗
1、f|0wjo可以调电压。一般流式调电压，先跑个阴性对照，然后跑阳性样本。
2、可以。根据flowjo使用说明书表示，flowjo使用之前需要调整电压，确保上机时电压要合适。FlowJo是九十年代美国斯坦福大学LeonardHerzenberg（FACS机器的发明者）实验室研发的一款流式数据分析软件。
3、在FlowJo中进行补偿调整，旨在消除荧光染料间的重叠与交叉污染。此过程需遵循以下技巧以确保数据准确性：首先，利用单色控制样本进行补偿调整。通过单独的样本，可以针对每个荧光染料在不同通道的表现进行精确调整，确保补偿的针对性。其次，设定合适的PMT电压至关重要。
流式细胞仪在采集样品过程中,可以重新调整吗
仪器的调整，包括PMT电压设置等，必须是在记录样本以前进行。可以先上样，根据数据来调整设置，调整完成后，再采集记录完整数据，这时候就不能在重新调整了。而且正在记录数据的软件也是不会有可以调整的选项的，所有可调剂参数这时候都是灰掉了。样本和样本之间，参数必须保持一致。
使用前或过程中，校准是必不可少的，因为它使相对测量具有绝对意义。标准样品如荧光微球和鸡血红细胞用于仪器的准直和定量标定。操作步骤包括：预热系统，调整气体压力，冲洗喷嘴，利用标准样品调至最佳荧光强度，设定流速和测量参数，同时监控数据。测量结束后，冲洗系统，数据可由计算机处理并打印。
一般可在用标准荧光微球等校准中完成。流式细胞术中所测得的量是相对值，因此需要在使用前或使用中对系统进行校准或标定，这样才能通过相对测量获得绝对的意义。因而FCM中的校准具有双重功能：仪器的准直调整和定量标度。
