流式调电压的目的（流式调增益是什么）

频道：其他日期：2025-01-26 10:57:48 浏览：9

本文目录一览：

1、流式实验该准备多少管样本?如何设置对照?
2、流式只设置了一个单染管可以调节补偿吗
3、流式细胞术最全攻略:从protocol到问题解决
4、流式细胞术怎么调节荧光补偿FITC/PE/PerCP/APC
5、流式电压调大了怎么办

流式实验该准备多少管样本?如何设置对照?

单阳对照即单阳管，是只添加一种荧光抗体的样本管。多色流式实验中，由于荧光素的发射波长覆盖范围较广，荧光可能产生重叠，对实验结果的数据分析造成一定的干扰。此种情况下，我们通常会设置单阳管进行补偿调节。同时，单阳管还可以辅助我们调节通道电压，防止信号超出接收范围。

准备实验管并编号，例如：1号管加入IgG1抗体，2号管加入CD4/CD8抗体，3号管加入CD14/CD45抗体，4号管则作为对照。在每支试管中加入相应抗体10μl，然后加入50μl全血样本，轻轻震荡混合后，室温下避光反应20分钟。在加入抗体前需确保血样充分混匀。

调节补偿时，应准备三管样本：一管未染色，一管含有PI阳性细胞，一管含有Annexin V阳性细胞。分别对这些样本进行染色，然后上机进行调节。需要注意的是，很多人用健康细胞来进行补偿调节，但健康细胞不会被染色，因此必须使用确定死亡的或正在凋亡的细胞作为阳性对照来进行调节补偿。

流式细胞术实验：制备细胞悬液，计数分装，按照每个EP（5ml）管1-2*10 6个细胞分装，3500rpm，4度离心。用100ulPBS重悬，加入10ul大鼠血清封闭，4度避光30min。加入相应的荧光标记的抗体，混匀，避光，4度孵育30min。加入1mlPBS洗两遍。

一般实验，检测需要记录10000个细胞。根据仪器的不同，死腔的体积也不一样，所以体积的要求不一样。理想状态下，样本浓度最好是每毫升一百万。另外，还需要一个样本管来设置机器（如果是单色），双色的话需要单色对照。这些对照管的细胞数要求很多。

流式调电压的目的（流式调增益是什么）

流式只设置了一个单染管可以调节补偿吗

流式只设置了一个单染管可以调节补偿。在流式实验中，由于不同荧光素的发射波长的覆盖范围不同，可能产生重叠，对实验结果的数据分析造成一定干扰，通常会设置单染管进行调节补偿。同时，单染管还可以辅助我们调节通道电压，防止信号超出接收范围。

做补偿调节，需要以下的样本，无任何染色的样本，分别是FITC， PE， PerCP还有APC单染阳性的样本，所以你这里需要一共5个管子。在纯手工的年代，你需要画出这四个颜色两两配对的散点图，比如FITC-PE， FITC-PerCP， FITC-APC， PE-PerCP，PE-APC， PerCP-APC，这一共6个散点图。

l细胞l补偿微球细胞通常是流式抗体单染管对照的样本首选，但是当细胞数量有限，无多余细胞用于抗体单染或感兴趣的表面抗原表达较低，阳性分群不明显不足以用来调节补偿时，建议选择补偿微球。

为减少荧光泄露影响，我们需在流式细胞仪上设置补偿。补偿是人为校正，移除不应出现的阳性信号，还原实验结果。例如，通过单染FITC样本作为补偿对照，调整后即可消除PE通道的信号。若仪器补偿调节不准确或未进行补偿，我们可在个人电脑上使用FlowJo软件进一步调节。FlowJo提供两种补偿调节方法。

A1：如果样本分批处理是在2个月内完成，且使用相同的试剂、样本类型和流式仪器，第一次实验的单染管和空白管的荧光补偿调节数据可以应用于后续实验。但为了确保实验结果的准确性，建议分批进行实验，至少进行3次实验。

流式细胞术最全攻略:从protocol到问题解决

1、流式细胞术是分析细胞物理化学特征和精确分选细胞的先进技术。其主要由液流系统、光路系统和检测分析系统构成。液流系统包括激光器、光路系统和检测分析系统。光路系统负责接收激光器发出的不同波长的激光，采集散射光信号和荧光信号。检测分析系统则汇总分析各通道光信号，得出样品群体细胞特征。

2、针对不同研究水平，提供了入门、初级、中阶等不同层次的实验技术Protocol，助你解决实验难题，拓展研究思路。细胞动物实验技术总结，覆盖细胞培养、流式细胞术、动物模型等，超过1400页内容，满足不同需求。实验方法全流程分享，从实验原理到操作要点，剖析每个步骤，确保操作准确无误。

3、首先，我们精心整理了一套覆盖不同研究水平的实验技术protocol，内容涉及细胞培养、流式细胞术、动物模型等基础实验技术，旨在为不同层次的科研工作者提供实用的指导。其次，常见细胞动物实验的总结涵盖了细胞培养、流式细胞术、动物模型等操作流程与注意事项，帮助实验者在实际操作中减少摸索时间，提高实验效率。

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流式细胞术怎么调节荧光补偿FITC/PE/PerCP/APC

1、在纯手工的年代，你需要画出这四个颜色两两配对的散点图，比如FITC-PE， FITC-PerCP， FITC-APC， PE-PerCP，PE-APC， PerCP-APC，这一共6个散点图。然后，先上未染色的样本，调节各个荧光通道的电压，是细胞都位于各个散点图的左下角。

2、为减少荧光泄露影响，我们需在流式细胞仪上设置补偿。补偿是人为校正，移除不应出现的阳性信号，还原实验结果。例如，通过单染FITC样本作为补偿对照，调整后即可消除PE通道的信号。若仪器补偿调节不准确或未进行补偿，我们可在个人电脑上使用FlowJo软件进一步调节。FlowJo提供两种补偿调节方法。

3、荧光素的搭配需遵循每个通道单一荧光素原则，且尽量避免光谱重叠，如选择FITC/PE-Cy7或FITC/APC来减少干扰。偶联荧光染料需注意其稳定性，曝光时间不宜过长。总的来说，合理选择和使用荧光素是提高流式细胞实验准确性和效率的关键，包括考虑机器特性和样本的特性，以及通过单标对照进行补偿调节。

4、如果目标Marker较少，比如三色、四色等，应尽量选择单体染料（例如：FITC、PE、APC等）。如果检测Marker较多，或者流式细胞仪激光器受限，串联染料（PE/CyaninePerCP/Cyanine5等）的使用，是非常有必要的。大部分串联染料，在光照或者实验操作有“固定”步骤时，容易出现降解。